弓形虫是一种全球流行的寄生虫，据估计约30%的人口感染。对于免疫功能低下者，弓形虫病可能引发严重疾病，而免疫系统健全者通常症状轻微，但此特性使该寄生虫成为全球性健康负担。目前针对急性期治疗的药物有限，且尚无能有效清除缓殖子阶段的药物。本文综述了近十年来针对缓殖子阶段的突破性研究成果，并探讨其对药物开发的启示。
引言
弓形虫属于顶复门专性细胞内寄生虫，感染全球约30%人群。该寄生虫具有独特的机会致病特性，可感染任何温血哺乳动物，包括人类。在中间宿主中，弓形虫通过两种不同形式进行无性生命周期：快速增殖的致病形式（速殖子）和缓慢增殖、形成囊状结构的休眠形式（缓殖子）。猫科动物是弓形虫的唯一终宿主，其体内可进行有性繁殖。感染途径包括摄入受猫科动物粪便污染的水或食物、食用含囊虫的未熟肉类，以及通过胎盘从感染母亲传染给胎儿。在哺乳动物宿主体内，速殖子形式易被免疫系统清除，但检测到免疫反应后会转化为受囊壁保护的缓殖子形式，导致慢性感染。免疫功能正常者感染后症状类似流感，而免疫抑制患者可能出现缓殖子向速殖子转化，引发脑部急性弓形虫病。
在美国，弓形虫感染导致的死亡率在食源性疾病中排名第二。目前治疗方案为乙胺嘧啶联合磺胺类抗生素，主要作用于速殖子阶段。但药物价格攀升和显著副作用限制了治疗效果。美国食品药品监督管理局（FDA）的不良事件报告系统（FAERS）显示，抗弓形虫药物被列为多起不良事件（包括死亡）的首要怀疑药物。值得注意的是，这些疗法对囊包裹的缓殖子形式效果有限。开发针对慢性弓形虫感染的新药势在必行。
弓形虫的生活周期
弓形虫通过有性和无性生殖机制增殖。在无性生殖过程中，速殖子利用滑行运动系统穿透中间宿主细胞。该过程需要顶端复合体的多个蛋白与肌动蛋白-肌球蛋白马达网络共同作用，通过棒状体和微线体蛋白识别宿主细胞膜。入侵后，速殖子形成由宿主膜衍生的寄生虫囊泡（PV），物理隔离宿主免疫反应、溶酶体融合和自噬作用。在PV内，速殖子通过内源增殖（endodyogeny）分裂，最终通过裂解宿主细胞释放数百个速殖子。在免疫压力和营养匮乏下，速殖子会转化为骨骼肌、心肌和脑部的囊包裹缓殖子形式。不同虫株（I、II、III型）在毒力和形成囊能力上存在差异，I型毒力强但难以形成囊，II/III型易形成囊导致慢性感染。猫科动物通过摄食组织囊虫启动有性生殖，最终通过粪便排出具有厚壁的卵囊，其孢子化后可在环境中存活18个月。
弓形虫病与现有治疗
美国仅批准乙胺嘧啶联合磺胺类抗生素作为一线疗法。乙胺嘧啶通过抑制二氢叶酸还原酶（DHFR）降低叶酸水平，阻断嘌呤/嘧啶合成，常与磺胺嘧啶联用增强DNA合成抑制效果，并补充甲酰四氢叶酸以减轻骨髓抑制副作用。但乙胺嘧啶缺乏显著特异性，且存在潜在致畸风险。其他药物如TMP-SMX、达普颂、阿托喹酮等对速殖子有效，但均无法清除缓殖子。目前研究显示三种新型靶点具有潜力：1）靶向氧化磷酸化和能量代谢的内醌类化合物；2）弓形虫组织蛋白酶-L（TgCPL），缓殖子生存所需半胱氨酸蛋白酶；3）钙依赖蛋白激酶1（TgCDPK1），其为寄生虫生命周期必需的丝氨酸/苏氨酸激酶。
缓殖子靶向新进展
最新研究表明，速殖子向缓殖子转化受主调控蛋白Bradyzoite Formation Deficient（TgBFD1/TgBFD2）控制。TgBFD1在小鼠模型中可诱导免疫应答，对II型虫株具保护作用。其表达受翻译起始因子TgeIF1.2调控。尽管删除TgBFD1相关通路未完全阻止复燃，但联合细胞毒性疗法可能成为有效策略。
缓殖子另一特征是淀粉样颗粒（AGs）积累。AGs具有植物样激酶（TgGWD）和动物样磷酸酶（TgLaforin）活性，是能量储存的关键。TgLaforin缺失会导致速殖子毒力减弱、囊虫负荷减少。抑制TgLaforin催化活性的化合物已作为先导化合物，结合细胞毒性疗法可成为有效治疗途径。
囊壁结构是慢性感染标志。植物提取物如姜提取物可显著减少慢性感染小鼠脑部囊虫数量，并减轻炎症和水肿。白藜芦醇和真菌代谢产物也显示出抗虫活性。蛋白质组学分析发现囊壁蛋白CST1/CST2缺失可降低囊虫负荷，而TgCLP1蛋白对缓殖子向速殖子转化至关重要。
弓形虫入侵依赖移动连接复合体（AMA2/AMA4与RON蛋白构成）。AMA4对慢性期囊虫负荷至关重要，其与RON2L1复合体免疫可保护小鼠免受慢性感染。双环氮杂丁烷类化合物靶向苯丙氨酰tRNA合成酶（TgPheRS），可同时抑制速殖子和缓殖子。此外，Tg68虫株的体外培养为缓殖子生物学研究提供了新模型。
结论
弓形虫通过中间宿主（包括人类）向终宿主猫科动物传播，其成功依赖于对宿主免疫的适应性。本文综述了近十年针对缓殖子生物学的新发现，包括表型转换调控机制、能量代谢通路、囊壁结构特性等。这些发现为靶向慢性感染提供了新方向，如通过抑制AG代谢、干扰移动连接复合体或开发针对TgBFD1/TgCLP1的疫苗。选择性靶向这些通路可能消除潜伏寄生虫，预防感染复燃，为慢性弓形虫病患者提供长期疗效。
作者贡献
所有作者均对本研究的构思、设计、数据分析和解释作出重要贡献，参与文章撰写和修订，最终批准出版版本，且同意提交至目标期刊，对工作所有方面负责。
利益声明
作者声明无利益冲突。
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