靶向癌蛋白RLIP作为卵巢癌新疗法
摘要
RLIP（Ral相互作用/结合蛋白，RalBP1）是一种存在于质膜、胞浆和细胞核的多功能蛋白，在卵巢等多组织中广泛表达。在肿瘤发生中，RLIP与实体瘤进展密切相关。作为非ABC抗凋亡转运体，它促进谷胱甘肽（GSH）结合物转运，在受体-配体胞吞作用中发挥作用，并参与药物转运和耐药性形成。其在多种恶性细胞系中过表达，表明其对癌细胞存活具有关键作用。在卵巢癌（OC）细胞系中，通过抗体或反义方法降低RLIP水平可诱导凋亡，即使不进行化疗亦然。与卡铂联合使用时，RLIP耗竭显著增强体外和体内模型的细胞死亡，表明RLIP下调通过药物依赖性和非依赖性机制促进凋亡。为评估RLIP特异性耗竭对凋亡的影响，我们在不同OC细胞系中应用RLIP反义技术， consistently 观察到生长抑制和细胞死亡。RLIP反义寡核苷酸、RLIP抗体与卡铂的细胞毒协同作用在细胞培养和OVCAR8 OC细胞异种移植模型中均得到证实。值得注意的是，通过抗体抑制RLIP在增强OC异种移植模型卡铂疗效方面与反义技术同样有效。这些发现凸显RLIP作为OC治疗靶点的潜力。
研究亮点
研究表明RLIP作为主要治疗靶点，在对抗人类OC不同阶段发展中具有潜力。RLIP水平降低在OC细胞中产生显著生长阻断效果和促凋亡效应。
引言
妇科恶性肿瘤约占美国新发癌症诊断的11%，其中卵巢癌（OC）、宫颈癌和子宫内膜癌在全球范围内最常见。OC仍是全球癌症相关死亡率最高的妇科恶性肿瘤之一。开发替代治疗策略是应对持续性、晚期和复发性妇科癌症的优先事项。这些恶性肿瘤的标准化疗通常包括作用于DNA的卡铂和靶向微管的紫杉醇联合方案。虽然这些药物取得了显著治疗效果，但化疗耐药性不可避免地发展，促使需要新的治疗策略。一个有前景的方法聚焦于凋亡调节和药物耐药相关蛋白，因为化疗主要通过凋亡通路诱导细胞死亡。RLIP（Ral相互作用/结合蛋白）因其在保护癌细胞免受凋亡应激中的作用受到关注。研究表明RLIP在包括OC的多种肿瘤中高表达，抑制或消除RLIP功能可诱导多种实体瘤和血液系统恶性肿瘤细胞死亡，特别是在OC细胞中。
在B16小鼠黑色素瘤模型中，RLIP耗竭显示出癌细胞选择性，正常细胞在反义治疗期间不受影响，导致肿瘤完全消退。这些发现表明，将RLIP抑制与传统化疗联合可能增强人类癌症治疗效果。事实上，既往研究表明涉及RLIP抑制的联合疗法可延长生存期，凸显这些治疗组分的潜在协同作用。为验证这一点，我们使用人类OC细胞培养和裸鼠异种移植模型进行研究。研究探讨了通过反义机制减少RLIP表达是否可促进异种移植小鼠OC治疗中的肿瘤消退。此外，我们还考察了卡铂与RLIP抗体联合使用的效果，假设该方法可增强治疗效果。
材料与方法
（为精简全文，此处略去材料与方法详细内容，重点保留核心发现及结论部分的翻译）
结果
RLIP靶向剂与卡铂联合降低OC细胞存活率
研究显示RLIP靶向剂与卡铂联合治疗可降低OC细胞存活率。为研究RLIP抑制对OC细胞的影响，我们使用RLIP抗体作为抑制剂并通过反义寡核苷酸降低蛋白水平。仅当OC细胞接受40 µg/ml RLIP抗体48小时处理时，生长减少（图1A），而前免疫血清处理组维持正常速率。MTT分析显示卡铂标准治疗使OC细胞在0-100 µM浓度范围内存活率呈剂量依赖性下降。非恶性HUVEC和HAVSMC培养未出现细胞生长抑制。数据显示RLIP抗体存在下卡铂的IC50值和细胞存活率（图1A）。
RLIP反义介导的RLIP耗竭对OC细胞的抗肿瘤效应
最近发现的证据证实恶性细胞对RLIP靶向剂的敏感性高于非恶性细胞。我们通过单次0.2 mg剂量RLIP反义寡核苷酸腹腔注射非荷瘤小鼠，24小时和48小时后处死，评估RLIP蛋白水平变化。ELISA和Bradford分析显示肝脏、肺、肾、脑、脾脏和心脏组织中RLIP含量稳定在0.4±0.05%总可提取蛋白水平（脾脏为0.6%）。RLIP反义处理导致RLIP水平在48小时后降至0.01%。免疫组化测试结果与ELISA数据一致，显示组织范围内的RLIP蛋白减少（图3）。
RLIP耗竭对侵袭的影响
我们的发现表明RLIP耗竭对OC细胞具有体外抗迁移和抗侵袭作用。转移是涉及细胞迁移和侵袭的多步骤过程。在RLIP减少条件下，OVCAR8 OC细胞经RLIP反义处理24小时后，Matrigel®侵袭小室实验显示细胞浸润数量显著减少。这些结果表明RLIP缺乏削弱OC细胞的体外运动能力（图4B）。
RLIP耗竭/抑制与卡铂的抗肿瘤协同作用
RLIP抑制剂与卡铂联合的抗肿瘤协同作用通过Chou-Talalay分析证实。研究发现RLIP抗体+RLIP反义+卡铂组合产生药物协同作用。实验室测试通过OVCAR8 OC细胞裸鼠异种移植模型成功验证。接受RLIP抗体+卡铂和RLIP反义+卡铂治疗组的肿瘤反应优于单药治疗组。联合所有三种药物治疗组肿瘤消退最快（图5A和B）。第56天肿瘤重量测量显示显著肿瘤缩小（图5C）。各治疗组动物体重相当，验证治疗方案的安全性（图5D）。
讨论
卵巢癌作为全球致死率最高的妇科恶性肿瘤之一，患者常因耐药性出现晚期诊断。PI3K/Akt信号通路在OC中过度激活，强烈促进癌细胞对化疗的耐药性。抗体-药物偶联物（ADC）开发受到关注，因其可将细胞毒性药物精准递送至癌细胞。Mirvetuximab soravtansine是FDA批准的ADC，对穿透卵巢癌耐药性具有潜在能力。
上皮性卵巢癌（EOC）仍是妇科相关死亡的主要原因。数据显示PARP抑制剂对携带BRCA突变的晚期EOC具有持久治疗益处。然而在缺乏BRCA突变和铂类耐药病例中，抑制效果减弱。高分级浆液性卵巢癌（HGSOC）通常在III/IV期才被诊断，导致严重临床并发症。
RLIP作为应激反应蛋白转运GS-E和多种药物，在恶性细胞中过表达。研究显示该转运体在癌细胞环境中具有显著抗凋亡功能。我们的研究表明腹腔注射RLIP抗体或反义寡核苷酸可使OVCAR8 OC异种移植瘤持续缓解。由于RLIP抗体和反义治疗效果相当，表明RLIP的抗凋亡和应激保护功能与其转运特性紧密相关。
结论
RLIP作为重要蛋白在卵巢和其他组织中发挥作用。OC作为导致死亡的最致命妇科疾病，药物耐药性构成重大治疗障碍。RLIP蛋白是外源化合物处理通路与GSH储备之间的必要桥梁。肿瘤在RLIP抑制和耗竭时出现消退，使卡铂治疗更有效。我们的发现确立RLIP作为卵巢癌发生的必要因子。通过抑制方法靶向阻断RLIP导致OC细胞凋亡，创造有效治疗靶点。实验室发现支持正在进行的研究，将探索RLIP耗竭或抑制作为人类OC治疗手段。
临床影响
OC是第三大常见且最致命的女性生殖系统恶性肿瘤。70%病例诊断时已转移。优化细胞减灭术联合辅助化疗难以预防复发。研究显示全球五年生存率约30-40%。我们检测到癌细胞内RLIP活性显著增强，其表达与转运活性和化学耐药水平强相关。使用反义或抗体抑制RLIP后，细胞凋亡易感性增加。结果表明OC细胞中RLIP的高表达创造了可行的治疗机会。
【全文结束】
