细胞外囊泡(EVs)介导关键的细胞间通讯，然而调控多泡体(MVE)与质膜融合及外泌体释放的分子机制仍不甚明了。磷脂酶D1(PLD1)产生磷脂酸(PA)，这是一种参与膜重塑的脂质，但PLD1和PA在外泌体分泌过程中的作用时机和机制尚未明确。本研究利用免疫荧光和全内反射荧光显微镜(TIRFM)在A549细胞中追踪单个CD63⁺ MVEs以及荧光标记的PLD1或PA报告分子(GFP-PASS)。研究发现PLD1定位于访问、停靠和融合过程中的CD63⁺ MVEs。PLD1的抑制或敲低显著降低了MVE融合频率，减少了分泌的小细胞外囊泡数量，同时仅轻微降低了质膜处的囊泡可用性。PLD1抑制还增加了膜近端溶酶体的数量，表明当融合受损时，MVEs被导向降解途径。与此同时，PA的动态变化具有阶段特异性：在访问阶段囊泡上PA保持较低水平，在停靠阶段逐渐积累，并在融合过程中表现出急剧升高后迅速下降。据报道，PA能够稳定负曲率，可能在融合过程中发挥作用。为测试PA是否影响融合孔行为，研究团队量化了单个融合事件的CD63衰减持续时间(t₁/₂)。k-均值聚类分析显示，衰减时间较长的囊泡具有较高的PA水平，而衰减时间短的事件则显示最低PA水平。PA强度与衰减持续时间呈正相关，而胞质GFP则无此相关性，表明PA与外泌体释放速率之间存在特定关系。此外，药理学激活PLD1增加了长衰减事件的比例。综上，这些发现表明PLD1生成的PA在两个层面上调控MVE命运：它促进从停靠到融合的转换并延长外泌体释放。这揭示了一种控制外泌体分泌效率和动力学的基于脂质的机制。
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